[摘要] 目的 觀察天麻細(xì)粉片在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的毒性和安全性。 方法 急性毒性試驗(yàn)采用昆明種小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，天麻細(xì)粉片劑量為15.0 g/kg體重，觀察14 d，記錄中毒表現(xiàn)。Ames試驗(yàn)采用了菌株TA97、TA98、TA100和TA102，在加S9與不加S9的條件下加入天麻細(xì)粉片，劑量分別為8、40、200、1000、5000 μg/皿。小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和精子畸變?cè)囼?yàn)均采用昆明種小鼠，天麻細(xì)粉片劑量為1.25、2.50、5.00 g/kg體重，用環(huán)磷酰胺40 mg/kg體重為陽(yáng)性對(duì)照。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)采用SD大鼠，雌、雄各40只，天麻細(xì)粉片劑量為2.81、5.62、11.25 g/kg體重，連續(xù)給予30 d，觀察動(dòng)物一般狀況和體重，測(cè)定血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)、臟器系數(shù)，并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。 結(jié)果 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示天麻細(xì)粉片在小鼠和大鼠中的最大耐受劑量(MTD)均>15.0 g/kg體重，屬無(wú)毒級(jí)。天麻細(xì)粉片的Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和精子畸變?cè)囼?yàn)結(jié)果均為陰性。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示動(dòng)物一般狀況良好，各劑量天麻細(xì)粉片對(duì)動(dòng)物的體重、進(jìn)食量、食物利用率以及臟器重量和臟器系數(shù)均無(wú)明顯影響，對(duì)動(dòng)物的血常規(guī)和血清生化指標(biāo)也無(wú)明顯影響。病理檢查顯示高劑量天麻細(xì)粉片對(duì)動(dòng)物的肝、腎、胃腸、脾、卵巢(睪丸)等組織無(wú)明顯毒性。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)條件下天麻細(xì)粉片未見(jiàn)明顯毒性或致畸和致突變作用。

　　[關(guān)鍵詞]藥學(xué)論文發(fā)表, 天麻細(xì)粉片,毒性,安全性

　　天麻(Gastrodia elata)為蘭科植物，《中國(guó)藥典》記載，天麻味甘，性微濕，入肝經(jīng)，具有平肝熄風(fēng)，祛風(fēng)定驚的功效。天麻中含有多種成分，如天麻素(gastrodin)、香莢蘭醛(vanilline)、香莢蘭醇(vanillyl alcohol)、維生素A類(lèi)、對(duì)羥基苯甲醛(P-hydroxybenzaldehyde)、對(duì)羥基苯甲醇(P-hydroxybenzyl alcohol)、琥珀酸(succinic acid)、胡蘿卜苷、谷甾醇、枸櫞酸、抗真菌蛋白和許多微量元素如鐵、氟、錳、鋅、碘等[1-2]。有研究表明，天麻粉及天麻細(xì)粉制成的片劑具有降血脂、降膽固醇、降低密度脂蛋白、降血糖等作用[3-6]。有報(bào)道表明，天麻粉在脂肪乳劑灌胃的大鼠中具有顯著的降血脂、減少肝臟脂肪蓄積、減輕肝臟脂肪變性及改善肝功能的作用[6]。但天麻細(xì)粉片劑型的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究未見(jiàn)報(bào)道，本文針對(duì)天麻細(xì)粉片進(jìn)行毒性及安全性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究。

　　1 材料與方法[7]

　　1.1 樣品

　　天麻細(xì)粉片由北京永康格林科技有限公司提供，批號(hào)090720，0.75 g/片[5]。

　　1.2 急性毒性試驗(yàn)

　　昆明種小鼠(合格證號(hào)：0157223，體重18～22 g)和SD大鼠(合格證號(hào)：0157222，體重180～220 g)均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，雌雄各10只，SPF級(jí)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房許可證號(hào)：SYXK(豫)2007-0008，屏障環(huán)境。實(shí)驗(yàn)方法為最大耐受劑量(MTD)法，天麻細(xì)粉片劑量為15.0 g/kg體重。具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。觀察周期為14 d，期間記錄各組動(dòng)物的中毒表現(xiàn)或死亡時(shí)間。

　　1.3 Ames試驗(yàn)

　　菌株TA97、TA98、TA100和TA102由天津市疾控中心提供，S9活化系統(tǒng)由河南省疾病預(yù)防控制中心毒理室制備，具體試驗(yàn)方法均參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。劑量選擇：天麻細(xì)粉片分為5個(gè)劑量組，分別為8、40、200、1000、5000 μg/皿。陽(yáng)性對(duì)照分別為3-硝基9-芴酮、甲基甲烷磺酸酯、2-氨基芴或1，8-二羥基蒽醌[8]，均購(gòu)自Sigma-Aldrich公司。本試驗(yàn)在加S9與不加S9的條件下均各重復(fù)2次，每次3個(gè)平行板。

　　1.4 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

　　采用昆明種小鼠(合格證號(hào)：0157223，體重25～30 g)，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，SPF級(jí)，雌雄各25只。具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]，小鼠分為5個(gè)組，即溶劑對(duì)照組、天麻細(xì)粉片3個(gè)劑量組(分別為1.25、2.50、5.00 g/kg體重)和陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40 mg/kg體重，由南通精華制藥有限公司提供，批號(hào)H32020796)。

　　1.5 小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)

　　采用昆明種小鼠(合格證號(hào)：0157223，體重25～35 g)，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，雄性38只，SPF級(jí)。具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。天麻細(xì)粉片和環(huán)磷酰胺(由南通精華制藥有限公司提供，批號(hào)H32020796)劑量同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)。

　　1.6 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

　　1.6.1 動(dòng)物 采用SD大鼠(合格證號(hào)：0157222)，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，SPF級(jí)，雌、雄各40只，分別按體重隨機(jī)分為4組，每組10只。

　　1.6.2 劑量 天麻細(xì)粉片分低、中、高3個(gè)劑量組，分別為人體推薦量[5]的25、50、100倍，即2.81、5.62、11.25 g/kg體重。受試物采用摻入飼料法給予，用去除輔料乳糖、預(yù)膠化淀粉、硬脂酸鎂的樣品作為受試物(相當(dāng)于去除50%輔料)。分別稱(chēng)取受試物98.44、196.88、393.75 g，酪蛋白(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供)19.69、39.38、78.75 g加粉飼料至7 kg混勻即成低、中、高3種不同樣品含量的飼料，連續(xù)給予30 d。

　　1.6.3 觀察指標(biāo) 分別觀察動(dòng)物的一般狀況、生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)、血液學(xué)及血液生化學(xué)檢查、臟器系數(shù)，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，具體試驗(yàn)方法均參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。 　　1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

　　采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2.1 急性毒性試驗(yàn)

　　天麻細(xì)粉片對(duì)小鼠和大鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。雌、雄小鼠和大鼠經(jīng)天麻細(xì)粉片空腹灌胃后觀察14 d均未見(jiàn)中毒癥狀，無(wú)死亡。本試驗(yàn)中天麻細(xì)粉片經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)的MTD>15.0 g/kg體重，屬無(wú)毒級(jí)。

　　2.2 Ames試驗(yàn)

　　Ames試驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)表2，陽(yáng)性對(duì)照組在加S9或不加S9條件下均導(dǎo)致回復(fù)突變菌落數(shù)明顯增加，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);天麻細(xì)粉片各劑量組在加S9或不加S9條件下均未引起回復(fù)突變菌落數(shù)增加，與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示天麻細(xì)粉片Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

　　2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

　　環(huán)磷酰胺導(dǎo)致小鼠骨髓細(xì)胞微核率顯著增加(P<0.01)，天麻細(xì)粉片各劑量組微核率與溶劑對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表3)，提示天麻細(xì)粉片小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)陰性。

　　2.4 小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)

　　環(huán)磷酰胺處理小鼠后精子畸形率顯著增加，與溶劑對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);天麻細(xì)粉片各劑量組精子畸形率未見(jiàn)明顯變化，與溶劑對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表4)，提示天麻細(xì)粉片小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)陰性。

　　2.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

　　2.5.1 動(dòng)物一般狀況 試驗(yàn)期間各組動(dòng)物的一般狀況未見(jiàn)明顯異常。

　　2.5.2 天麻細(xì)粉片對(duì)大鼠體重、進(jìn)食量和臟器系數(shù)的影響 試驗(yàn)期間各劑量天麻細(xì)粉片對(duì)動(dòng)物的體重未造成明顯影響，與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各劑量天麻細(xì)粉片對(duì)動(dòng)物的進(jìn)食量、食物利用率以及肝、腎、脾、性腺等臟器的重量和系數(shù)無(wú)明顯影響(數(shù)據(jù)未顯示)(表5)。

　　2.5.3 血液學(xué)和血清生化檢查結(jié)果 各劑量天麻細(xì)粉片對(duì)動(dòng)物的血常規(guī)指標(biāo)以及血清生化指標(biāo)無(wú)明顯影響(表6)。

　　2.5.4 病理組織學(xué)檢查 各劑量天麻細(xì)粉片給藥后肉眼觀察動(dòng)物臟器顏色、形狀、大小等均未見(jiàn)明顯病變。病理檢查標(biāo)本為對(duì)照組和天麻細(xì)粉片高劑量組的肝、腎、胃、腸、脾、卵巢(睪丸)。標(biāo)本系甲醛固定，經(jīng)水洗、修塊、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色。結(jié)果(表7)顯示，對(duì)照組20只大鼠中有2例動(dòng)物肝小葉有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，1例動(dòng)物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);天麻細(xì)粉片高劑量組20只大鼠中有2例動(dòng)物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);其他臟器均未觀察到明顯病理改變。高劑量天麻細(xì)粉片對(duì)動(dòng)物的肝、腎、胃腸、脾、卵巢(睪丸)等組織無(wú)明顯毒性。

　　3 討論

　　天麻作為天然藥物在我國(guó)已有超過(guò)一千年的應(yīng)用歷史。目前，天麻及其制劑在臨床上主要用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病如癲癇、眩暈等[9]。此外，天麻還具有代謝調(diào)節(jié)[3-6]、抗炎[10-11]和抗血小板聚集[12]等藥理作用，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。盡管大部分報(bào)道顯示天麻安全性好，毒副作用小[3-6]，但對(duì)其片劑進(jìn)行系統(tǒng)性的毒理學(xué)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

　　本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，天麻細(xì)粉片在小鼠和大鼠中的口服MTD>15.0 g/kg體重，屬無(wú)毒級(jí)。天麻細(xì)粉片的Ames試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)結(jié)果均為陰性，提示無(wú)致畸和致突變的作用。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示天麻細(xì)粉片在雌、雄大鼠中劑量為11.25 g/kg體重(相當(dāng)于人體推薦量的100倍)時(shí)對(duì)血液學(xué)和組織器官病理學(xué)檢測(cè)指標(biāo)無(wú)明顯影響。

　　有關(guān)天麻制成的其他劑型的毒性研究也有報(bào)道。如天麻軟膠囊的毒性研究顯示[13]，對(duì)小鼠經(jīng)口MTD>15.0 g/kg體重，大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)未觀察到中毒表現(xiàn)，給藥組動(dòng)物的體重、食物利用率、血液學(xué)和血液生化等指標(biāo)值、各臟器的臟/體比值與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示，其在小鼠中的MTD>140 g/kg體重，且長(zhǎng)期連續(xù)口服給藥安全[14]。SD大鼠連續(xù)30 d給予天麻藥材粉5.845 g/kg體重未觀察到有害作用[15]。妊娠期SD大鼠給予天麻藥材粉6.16 g/kg體重對(duì)胚胎及胎仔發(fā)育無(wú)明顯毒性作用[16]。

　　綜上所述，本研究為天麻片劑的臨床應(yīng)用提供了安全性數(shù)據(jù)，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究與文獻(xiàn)報(bào)道[13-16]，天麻制劑無(wú)論是片劑、膠囊還是粉劑，在動(dòng)物中均未觀察到明顯毒副作用以及致畸和致突變作用。由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中天麻的劑量遠(yuǎn)高于人體推薦量，提示天麻在臨床推薦劑量下應(yīng)用安全可靠。

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