雙歧桿菌做為人體腸道內(nèi)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，對(duì)人體具有許多重要生理功能的有益菌。隨著微生態(tài)學(xué)的迅猛發(fā)展，雙歧桿菌的臨床保健作用逐漸被人們認(rèn)識(shí)和接受，并對(duì)其進(jìn)行了更深入的研究，本文這篇藥學(xué)論文范文就基于此進(jìn)行研究。

　　摘要:目的：探索藻類中藥中多糖對(duì)雙歧桿菌的促增殖作用。方法：在恒溫條件下，以時(shí)間和多糖濃度為影響因素，了解不同藻類中多糖對(duì)雙歧桿菌的促增殖作用，對(duì)其量效關(guān)系進(jìn)行分析結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在37℃多糖濃度在0到2%范圍內(nèi)，雙歧桿菌數(shù)隨多糖濃度的增加而上升;多糖濃度繼續(xù)升高，則反而下降。結(jié)論：海藻中多糖在一定濃度下能很好地促雙歧桿菌生長(zhǎng)。

　　關(guān)鍵字:多糖,雙歧桿菌,促增殖,藥學(xué)論文范文

　　一、前言

　　藻類是低等的海洋隱花類植物，包括紫菜、海帶、羊棲菜等。其含有多種生命物質(zhì)，尤其是海藻多糖有調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂與分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和衰老及維持生命有機(jī)體的正常代謝的功效活性。能夠起到抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、抗突變、抗氧化、增強(qiáng)免疫機(jī)能的效果。隨著多糖研究的進(jìn)展，藻類以其很好的藥用價(jià)值而得到廣泛和深入的研究。

　　研究藥用海藻中多糖對(duì)雙歧桿菌的促增殖作用，驗(yàn)證海藻中多糖對(duì)雙歧桿菌有顯著的增殖作用，可作為雙歧因子進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研制，促進(jìn)微生態(tài)學(xué)發(fā)展。而我們的日常膳食結(jié)構(gòu)中盡可能多調(diào)配這類食物，以促進(jìn)腸道內(nèi)雙歧桿菌的生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)，使雙歧桿菌等有益菌群占優(yōu)勢(shì)。

　　雙歧桿菌是人體的生理細(xì)菌，為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，無(wú)芽孢，不運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)格厭氧，形態(tài)多變，不同種或同種不同菌齡，不同生長(zhǎng)環(huán)境而呈現(xiàn)彎曲桿狀L或Y形等多種形態(tài)而得名，是人體腸道內(nèi)數(shù)量最多餓一種菌。終生存在于人體與人的健康息息相關(guān)。

　　人的生理、免疫、營(yíng)養(yǎng)、消化、抗腫瘤、抗衰老、藥物效能等都離不開(kāi)人體自身攜帶的微生物群人體腸道內(nèi)的雙歧桿菌具有有病治病，無(wú)病防病和保健的作用，它能形成生理屏障，阻止致病菌的定植和入侵，保護(hù)宿主免受致病菌侵害。能改善蛋白質(zhì)代謝，提供多種B族維生素，能促進(jìn)鈣鐵吸收。還能提高免疫力，增強(qiáng)抗腫瘤等多種作用。雙歧桿菌的不足意味著人體發(fā)生健康危機(jī)，需要及時(shí)補(bǔ)充。

　　隨著微生態(tài)理論體系的建立，使雙歧桿菌的臨床保健作用逐漸被人們認(rèn)識(shí)和接受�，F(xiàn)國(guó)內(nèi)雙歧桿菌微生態(tài)調(diào)節(jié)劑所用菌的生產(chǎn)培養(yǎng)原料較貴，如能選擇合適劑量的海藻多糖直接調(diào)節(jié)人體腸道菌，增殖體內(nèi)雙歧桿菌則能有較廣的發(fā)展前景。

　　本實(shí)驗(yàn)中的海藻多糖為雙歧因子。能促進(jìn)雙歧桿菌增殖所必需的無(wú)毒物質(zhì)稱為雙歧因子，雙歧因子有的是含氮多糖或寡糖，有的是粘蛋白或酶類，有的是肽類或核酸成分其來(lái)源充足，分布廣泛。

　　二、海藻多糖促雙歧桿菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

　　(一)實(shí)驗(yàn)材料

　　1.樣品

　　羊棲菜多糖：利用乙醇沉淀法從羊棲菜中提取。

　　海帶多糖：利用乙醇沉淀法從海帶中提取。

　　海藻 為馬尾藻科植物海蒿子或羊棲菜的藻體。咸寒，歸肝腎經(jīng)，有消痰軟堅(jiān)，利水消腫之作用。《本草綱目》中記載：海藻，現(xiàn)咸能潤(rùn)下，寒能泄熱引水，故能消癭瘤，結(jié)核之堅(jiān)聚，而除浮腫、腳氣、痰氣之濕熱，使邪氣自小便出也。

　　昆布 為海帶科植物海帶或翅藻科植物昆布的葉狀體。咸寒，歸肝腎經(jīng)，有消痰軟堅(jiān)，利水消腫之作用�！秳e錄》記載昆布，主十二種水腫，癭瘤聚結(jié)氣。

　　本實(shí)驗(yàn)中將用羊棲菜和海帶

　　羊棲菜[Sargassum fusiforme (Harv.) Setch]：藻體黃褐色，肥厚多汁，高15~40cm。固著器為是北太平洋西部特有的暖溫帶植物，屬褐藻類馬尾藻科。是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的藻類，干品每百克含蛋白質(zhì)10.6克，糖類47克，灰分18.3克，脂肪1.3克，鈣1400毫克，磷100毫克，鉀4400毫克，鐵5.5毫克，胡蘿卜素550毫克;還有多種維生素和微量元素。

　　海帶[Laminaria japonica Aresch]屬褐藻門海帶科，是一種大型食用海藻，有豐富的營(yíng)養(yǎng)。每100克海帶中含有蛋白質(zhì)8克， 甘露醇14克，鉀4.36克、鐵150毫克，超過(guò)菠菜，油菜幾倍至幾十倍。更為突出的是，海帶富含微量元素碘，每100克海帶含碘高達(dá)24000微克。

　　多糖提取工藝

　　取海藻置于托盤放入恒溫培養(yǎng)箱低溫烘干，用電磨機(jī)打碎，使之成粉末狀。用天平稱取海藻粉50g放入500ml錐形瓶中加蒸餾水250ml放置于95℃水浴鍋中，并隔10min晃一次，4h后取出，冷卻到室溫。離心取上清液，在離心管中加無(wú)水乙醇，得到沉淀再次離心，取沉淀(多糖)，用蒸餾水沖洗數(shù)遍，于37度烘箱中烘干所得沉淀為粗多糖。

　　2.培養(yǎng)基：MRS肉湯培養(yǎng)基：

　　蛋白胨10g、肉浸膏10 g、酵母膏5g、葡萄糖20 g、吐溫80 1ml、K2HPO42g、醋酸鈉5g、檸檬酸銨2g、MgSO4·7H2O 0.2g、MnSO4·4H2O 0.05g、蒸餾水1000ml。pH值6.4。

　　20%肉湯：蛋白胨1g、肉浸膏1g、蒸餾水1000ml。pH值6.4。

　　3.菌株：取自麗珠腸樂(lè)膠囊(由雙歧桿菌制成的干粉膠囊)，珠海麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)20030404。

　　4.實(shí)驗(yàn)儀器

　　Nbox Jar 7.0L，法國(guó)生物梅里埃公司

　　S.C.303型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)與試劑

　　厭氧培養(yǎng)盒GE箱，嘉興新睦電器廠

　　除氧劑，法國(guó)生物梅里埃公司

　　LD4-2高速離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠

　　754型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠

　　TG328B電光分析天平

　　THZ-82型恒溫振蕩器，江蘇太倉(cāng)醫(yī)療器械廠

　　(二)實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

　　1.菌液與溶液制備

　　菌液制備：無(wú)菌條件下，從麗珠腸樂(lè)膠囊中取出內(nèi)容物，溶解于10ml濃度為0.9%的無(wú)菌生理鹽水，攪拌均勻后用接種針蘸取少許溶液，涂布于無(wú)菌MRS固體培養(yǎng)基平板上，37℃下，于厭氧培養(yǎng)盒培養(yǎng)3d。再?gòu)钠桨逯刑羧∩珴傻�黃、圓滑突起的單菌落，接入40ml MRS液體培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)2d。取少量培養(yǎng)液，測(cè)得菌液濃度為2.7×108個(gè)/ml。使用前稀釋至1.0×108個(gè)/ml備用。

　　多糖溶液制備：利用蒽酮硫酸法測(cè)得醇沉淀中多糖含量：羊棲菜：25.2%;海帶：24.7%;將2種粗多糖分別配制成一定濃度的溶液，并按實(shí)驗(yàn)需要稀釋為8.0%、4.0%、2.0%、1.0%、0.5%的水溶液，每管各10ml，分別加入濃度為20%的肉湯培養(yǎng)基10ml混勻，同時(shí)制備作為對(duì)照的10%肉湯，115℃濕熱滅菌15min后備用。

　　附. 蒽酮硫酸法測(cè)定多糖含量

　　原理：糖類遇濃硫酸脫水生成糠醛或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生有色物質(zhì)，反應(yīng)后溶液呈藍(lán)綠色，于620nm處有最大吸收，顯色與多糖含量呈線性關(guān)系。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：分別取0.1g/L的葡聚糖溶液0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.60，0.80ml，用蒸餾水補(bǔ)到1.00ml;分別加入4.00ml蒽酮試劑，迅速浸入冰水浴中冷卻，各管加完一起進(jìn)入沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸10分鐘取出，用自來(lái)水冷卻，室溫放置10分鐘左右，于620nm比色。以同樣處理的重蒸餾水為空白，進(jìn)行比色。以光密度(OD值)為縱坐標(biāo)，糖的含量微克數(shù)為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　樣品含量測(cè)定：取相當(dāng)于糖濃度50μg/ml左右的樣品溶液1.00ml，加入蒽酮試劑，同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作之操作，比色測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品濃度計(jì)算含量。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

　　表為標(biāo)準(zhǔn)曲線相應(yīng)數(shù)據(jù)

　　0 1 2 3 4 5 6 7 含糖量 ug 0 5 10 20 30 40 60 80OD值0.0000.0310.0580.1120.2040.2850.3940.526

　　曲線Y=A+BX 得：A= -4.89×10-3 B=6.71X10-3 r=0.998

　　依數(shù)據(jù)繪曲線

　　Y=0.00671-0.00489X;r=0.998

　　用分析天平取海帶多糖0.1213g，溶于100ml蒸餾水中，取1ml進(jìn)行吸光度測(cè)定。得吸光度：0.153，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得多糖29.9ug海帶提取物含多糖%=0.0299×1000/121.3×100%=24.7%

　　用分析天平取羊棲菜多糖0.2008g，溶于100ml蒸餾水中，取1ml進(jìn)行吸光度測(cè)定。得吸光度：0.254，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得多糖50.6ug

　　羊棲菜提取物含多糖%=0.0506×1000/200.8×100%=25.2%

　　三.促雙歧桿菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

　　(一)時(shí)間因素

　　取3組濃度為2.0%、1.0%的多糖溶液管與作為對(duì)照的10%的肉湯液體管各10ml,加入濃度為107個(gè)/ml的雙歧桿菌菌液各0.1ml，37℃厭氧培養(yǎng)。12h、24h、48h后，分別取樣用無(wú)菌生理鹽水稀釋，接種于MRS瓊脂平板上，37℃厭氧培養(yǎng)4d，計(jì)算出每ml培養(yǎng)液中所含的活菌數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。以雙歧桿菌活菌數(shù)對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪得圖1。

　　表1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)雙歧桿菌株的影響 log10n/ml

　　多糖濃度時(shí)間1.0%2.0%對(duì)照12h7.9868.2456.02324h8.3018.5686.17648h8.1218.3026.094

　　圖1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)雙歧桿菌的影響

　　注：圖中縱坐標(biāo)為菌液濃度對(duì)數(shù)值;橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時(shí)間

　　(二)濃度因素

　　根據(jù)表1選擇最佳的多糖溶液培養(yǎng)時(shí)間24h。取兩組海藻多糖濃度為4.0%、2.0%、1.0%、0.5%、的多糖肉湯溶液管以及作為對(duì)照的10%肉湯管各9ml，分別加入濃度為106個(gè)/ml的雙歧桿菌菌液1ml，37℃厭氧培養(yǎng)24h，取樣用無(wú)菌生理鹽水稀釋后，接種于MRS瓊脂平板上，37℃厭氧培養(yǎng)4d，計(jì)算出每ml培養(yǎng)液中所含的活菌數(shù)。表2即為各濃度多糖培養(yǎng)液中雙歧桿菌的活菌數(shù)。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果換算成以10為底的對(duì)數(shù)值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較，結(jié)果見(jiàn)表3。以雙歧桿菌活菌數(shù)對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，多糖濃度為橫坐標(biāo)，繪得圖2。

　　表2不同濃度海藻多糖對(duì)雙歧桿菌增殖作用的影響 單位：個(gè)/ml

　　多糖來(lái)源多糖濃度羊棲菜海帶0.0%7.4×1077.4×1070.5%8.7×1072.0×1081.0%1.0×1083.0×1082.0%2.0×1084.2×1084.0%1.5×1082.9×108

　　表3 各項(xiàng)增殖菌數(shù)的對(duì)數(shù)值及其統(tǒng)計(jì)分析 多糖來(lái)源 多糖濃度羊棲菜海帶試驗(yàn)組與空白組方差分析0.0%7.8697.869-0.5%7.9408.301P<0.051.0%8.0008.477P<0.052.0%8.3018.623P<0.054.0%8.1768.462P<0.05

　　圖2 不同濃度海藻多糖對(duì)雙歧桿菌增殖作用的影響 注：圖中縱坐標(biāo)為菌液濃度對(duì)數(shù)值;橫坐標(biāo)為多糖濃度

　　三、分析與討論

　　從表2可以看到，在試驗(yàn)濃度下，各類海藻多糖對(duì)雙歧桿菌均有顯著的促生長(zhǎng)作用。加入不同濃度多糖的各試管雙歧桿菌活菌數(shù)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。圖2顯示，多糖在0.5%～2.0%的范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，雙歧桿菌的活菌數(shù)呈上升趨勢(shì)，增長(zhǎng)較為平緩，當(dāng)濃度為2.0%的時(shí)候到達(dá)頂峰。說(shuō)明在這一范圍內(nèi)，羊棲菜多糖對(duì)雙歧桿菌的促生長(zhǎng)作用與濃度呈正相關(guān)。然而在多糖濃度為4.0%的時(shí)候，雙歧桿菌活菌數(shù)出現(xiàn)下降。推測(cè)其原因，隨著多糖濃度的增高，培養(yǎng)液滲透壓也逐漸增大，使環(huán)境變得不利于雙歧桿菌生長(zhǎng)，從而造成菌數(shù)減少。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示適合雙歧桿菌生長(zhǎng)的羊棲菜多糖濃度在2.0%～4.0%之間。在不同的海藻多糖之間，雙歧桿菌的活菌數(shù)也存在著差異，海帶多糖的促生長(zhǎng)作用較強(qiáng)，而羊棲菜促生長(zhǎng)則相對(duì)較弱，與前者相差一倍。在2.0%多糖濃度下37℃培養(yǎng)24h，各類海藻多糖的促生長(zhǎng)作用最強(qiáng)，海帶多糖培養(yǎng)液可以使雙歧桿菌的活菌數(shù)達(dá)到原來(lái)的6倍。

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明海藻多糖是非常優(yōu)良的雙歧桿菌促生長(zhǎng)因子，能有效增加腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量。在服用海藻多糖時(shí)應(yīng)控制好多糖的用量或者采用緩釋技術(shù)，使得多糖在一個(gè)合適的濃度到達(dá)腸道，并保持一定的時(shí)間，對(duì)雙歧桿菌的生長(zhǎng)起到促進(jìn)作用，促進(jìn)雙歧桿菌在腸道內(nèi)的增殖和定植，優(yōu)化腸道的結(jié)構(gòu)，維護(hù)機(jī)體的生態(tài)平衡，達(dá)到最佳的保健功效。根據(jù)表1，雙歧桿菌在厭氧條件下37℃培養(yǎng)24h，活菌數(shù)達(dá)到高峰，此時(shí)是獲得雙歧桿菌最高生物量的最佳時(shí)間，為雙歧桿菌為主的微生態(tài)活菌制劑生產(chǎn)提供了有用的條件參數(shù)。

　　本實(shí)驗(yàn)采用了10%肉湯培養(yǎng)基為基質(zhì)，使各種營(yíng)養(yǎng)成分降低到僅能維持備試菌生長(zhǎng)的濃度，目的是減少營(yíng)養(yǎng)成分的影響，更能準(zhǔn)確反應(yīng)添加各類多糖的促進(jìn)效果。目前增殖腸道內(nèi)雙歧桿菌有兩種方法，一是通過(guò)攝取含雙歧桿菌的食物，補(bǔ)充雙歧桿菌的不足。二是服用促雙歧桿菌生長(zhǎng)的雙歧因子，直接扶持、促進(jìn)腸道中原雙歧桿菌的生長(zhǎng)、繁殖，優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)，起調(diào)節(jié)腸道菌群的作用。但前者由于在儲(chǔ)存過(guò)程中活菌數(shù)不穩(wěn)定而影響了治療效果。本研究證實(shí)，海藻多糖是一種新的天然雙歧因子，它對(duì)雙歧桿菌促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)為海藻類中藥的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也提示我們正確利用野生植物資源。如把海藻這類資源豐富的野生植物改造成營(yíng)養(yǎng)保健食品，前景是非常廣闊的。

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　　《藥學(xué)學(xué)報(bào)》創(chuàng)刊于1953年7月，是中國(guó)自然科學(xué)核心期刊、中文核心期刊，其前身是我國(guó)歷史最悠久的學(xué)術(shù)期刊《中華藥學(xué)雜志》(1936年創(chuàng)刊)。本刊為報(bào)道我國(guó)藥學(xué)科研成果、促進(jìn)國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)交流的綜合性學(xué)術(shù)刊物，國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)行。以探討新理論，介紹新技術(shù)、新方法、新進(jìn)展，開(kāi)展學(xué)術(shù)交流為主要宗旨。發(fā)表文章包括藥理學(xué)、合成藥物化學(xué)、天然藥物化學(xué)、藥物分析學(xué)、生藥學(xué)、藥劑學(xué)與抗生素學(xué)等方面的研究論文、研究簡(jiǎn)報(bào)、綜述、學(xué)術(shù)動(dòng)態(tài)與述評(píng)等。以本學(xué)科從事科研和高等教育的專業(yè)人員為主要讀者對(duì)象。