藥物的親脂性或疏水性影響著藥物在細胞膜的滲透性，油水分配系數(shù)和平衡溶解度是反映藥物脂溶性的2個不可或缺的重要理化參數(shù)，這2個重要理化參數(shù)對研究藥物的體內(nèi)過程和指導臨床用藥具有重要的意義[1-3]。

　　[摘要]目的：測定白頭翁皂苷D的油水分配系數(shù)及其在不同溶劑中的平衡溶解度。方法：采用搖瓶法與高效液相色譜法相結(jié)合測定白頭翁皂苷D的油水分配系數(shù)，采用高效液相色譜法測定白頭翁皂苷D在6種有機溶劑及不同pH緩沖液中的平衡溶解度。結(jié)果：白頭翁皂苷D在不同pH條件下油水分配系數(shù)大于零，隨著pH升高白頭翁皂苷D的平衡溶解度逐漸增加，在不同溶劑中白頭翁皂苷D的平衡溶解度以甲醇最大（達到255.89g・L-1），乙腈中最小（0.20g・L-1）。結(jié)論：在胃腸生理條件下，白頭翁皂苷D以分子狀態(tài)形式存在，由lgPapp可知其吸收性較好，但水溶性較差，提示增加白頭翁皂苷D的溶解度可能有利于提高其生物利用度。

　　[關(guān)鍵詞]中國全科醫(yī)學雜志投稿,HPLC,白頭翁皂苷D,油水分配系數(shù),平衡溶解度

　　白頭翁皂苷D[4]（PulsatillasaponinD，PSD）是從白頭翁中分離出來的一種常春藤皂苷，對HL-60腫瘤細胞和LLC腫瘤細胞具有很強的抑制作用[5-6]，筆者前期研究亦發(fā)現(xiàn)其對人肝癌細胞SMMC-7721、人結(jié)直腸腺癌細胞HCT116等腫瘤細胞具有較強的活性，說明白頭翁皂苷D具有成藥性的可能。由于白頭翁皂苷D的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)未見相關(guān)報道，同時，為了進一步開展白頭翁皂苷D體內(nèi)吸收過程及劑型研究，本文通過對白頭翁皂苷D平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)的測定以期為白頭翁皂苷D劑型合理選擇及藥動學研究提供參考。

　　1材料

　　白頭翁皂苷D對照品（中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心對照品室提供，經(jīng)MS，NMR鑒定、HPLC測定，純度在99%以上）；甲醇（上海振興化工一廠，色譜純）；磷酸二氫鈉（汕頭市西隴化工廠有限公司）；正辛醇（汕頭市西隴化工廠有限公司，分析純）；其他試劑均為分析純。

　　高效液相色譜儀：Agilent1260色譜泵，二級管陣列檢測器（DAD），美國安捷倫科技公司；KQ-4000B型超聲清洗機（鞏義市予華儀器有限責任公司）；AL204電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；TDL-40B飛鴿牌臺式離心機（上海安亭科學儀器廠制造）；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；SHZ-82氣浴恒溫振蕩器（常州國華電器有限公司）；MilliporeSynergy超純水系統(tǒng)（美國密理博公司）。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1樣品的制備

　　2.1.1正辛醇水飽和液的制備精密吸取200mL正辛醇至500mL具塞錐形瓶，加水200mL，置磁力攪拌器上，攪拌24h，靜置，備用。

　　2.1.2不同pH緩沖液的制備按《中國藥典》（2010年版二部）附錄ⅩⅤD緩沖液的配制方法，分別配制pH為2.0，5.0，5.8，6.8，7.0，7.6的磷酸鹽緩沖液[7]。另稱取氯化鈉2g、量取濃鹽酸7mL至1000mL量瓶中，加水稀釋至刻度配成pH1.2的緩沖液。

　　2.1.3對照品溶液的制備精密稱取白頭翁皂苷D對照品（五氧化二磷減壓干燥24h）13.6mg，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.544g・L-1的對照品溶液。

　　2.2白頭翁皂苷D的含量測定

　　2.2.1檢測波長的選擇取白頭翁皂苷D對照品溶液，以甲醇為空白樣品，采用紫外分光光度法在190～400nm進行全波長掃描，白頭翁皂苷D在203nm處有最大吸收，因此選擇203nm作為白頭翁皂苷D的檢測波長。

　　2.2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗Agilent1260，大連依利特HyperisilODS2C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相甲醇-水-甲酸（75∶25∶0.1），流速1.0mL・min-1，柱溫30℃，紫外檢測波長203nm。理論塔板數(shù)按白頭翁皂苷D計算不低于3000，分離度大于1.5，色譜圖見圖1。

　　2.2.3線性關(guān)系考察取白頭翁皂苷D對照品溶液液（0.523g・L-1），分別進樣1，2，5，10，15，20μL。按2.2.2項下色譜條件進行測定，分別記錄白頭翁皂苷D的峰面積。以進樣濃度（Y）為橫坐標，峰面積（X）為縱坐標作圖并進行線性回歸，得線性方程Y=3320.1X-8.9146，r=0.9999（n=6），結(jié)果表明白頭翁皂苷D進樣質(zhì)量濃度在0.0523～1.0460g・L-1呈良好線性關(guān)系。

　　2.2.4精密度試驗精密吸取白頭翁皂苷D對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，每次進樣10μL分別記錄峰面積，結(jié)果RSD1.6%，說明該方法精密度良好。

　　2.2.5穩(wěn)定性試驗取已知不同表觀油水分配系數(shù)及不同溶劑下的供試品溶液，分別在0，1，2，6，12，24h條件下取樣，按上述色譜條件進樣10μL進行檢測并記錄峰面積，結(jié)果RSD均小于2%，表明所有供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

　　2.3白頭翁皂苷D表觀油水分配系數(shù)的測定

　　精密稱取白頭翁皂苷D樣品0.0264g，置50mL水飽和的正辛醇溶液，超聲溶解，離心15min（4000r・min-1），備用。精密吸取含白頭翁皂苷D的水飽和正辛醇2mL，置10mL具塞塑料管中，分別加入2mL正辛醇飽和水及不同pH的磷酸鹽緩沖液，將具塞塑料管放入恒溫振蕩器中，控制溫度（25±1）℃，振搖72h直至平衡，4000r・min-1離心10min，取上層正辛醇溶液，按照上述色譜條件進樣10μL進行測定，記錄峰面積。分別計算其濃度，并按下式計算表觀油水分配系數(shù)。Papp=（CV-CwVw）/CwVw，式中Papp為白頭翁皂苷D的表觀油水分配系數(shù)；C為正辛醇中白頭翁皂苷D的初始濃度，V為水飽和正辛醇的體積（即2.0mL）；Cw為分配平衡時白頭翁皂苷D在水相中測得的濃度，Vw為水相體積（即2.0mL）。按照公式計算不同pH磷酸鹽緩沖溶液中表觀正辛醇/緩沖溶液分配系數(shù)，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，pH在1.2，5.0，6.0，6.8，7.0，7.6時，其lgPapp均大于零，可以預測在此pH條件下該化合物親脂性較強，當pH為6.8時其Papp為7.48，lgPapp=0.87，說明在此pH條件下有利于吸收。

　　2.4白頭翁皂苷D溶解度的測定

　　取過量白頭翁皂苷D于10mL具塞試管中，分別加以下2組介質(zhì)5mL：①有機溶劑組，包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮、正丁醇、二氯甲烷；②緩沖溶液組，pH分別為1.2，2.0，4.0，5.8，6.8，7.6，于25℃空氣振蕩器中振搖，分別在不同時間點取樣，1萬r・min-1離心15min后，根據(jù)線性范圍采用甲醇對樣品進行適當稀釋，按上述色譜條件進樣10μL，記錄峰面積，計算白頭翁皂苷D在各介質(zhì)中的含量，并計算其在不同介質(zhì)中的平衡溶解度。結(jié)果見圖2，3。

　　由圖2可知，白頭翁皂苷D在不同pH緩沖溶液中隨著pH不斷升高，溶解度逐漸增加，當pH為7.6時，其平衡溶解度達到0.38g・L-1；由圖3可知，白頭翁皂苷D在不同介質(zhì)中的平衡溶解度以甲醇為最大，達到255.89g・L-1，在乙腈中最小僅為0.20g・L-1。

　　3討論

　　根據(jù)白頭翁皂苷D的分子結(jié)構(gòu)可知，白頭翁皂苷D在堿性條件下易形成鹽，會改變其溶解性，從而導致測定結(jié)果不準確，故選擇在不同消化道的生理pH條件下測定其表觀溶解度及油水分配系數(shù)。

　　油水分配系數(shù)測定的方法有搖瓶法、產(chǎn)生柱法以及高效液相色譜法[8-13]。由于產(chǎn)生柱法測定過程繁雜、平衡時間太長，反相高效液相色譜法需采用已知P值的同系物對照品來建立標準曲線，費用高，而經(jīng)典的搖瓶法操作簡單、成本低[14]，所以采用搖瓶法測定白頭翁皂苷D的油水分配系數(shù)。此外，因白頭翁皂苷D的分子結(jié)構(gòu)中具有五環(huán)三萜類的母核使其具有較高的脂溶性，而分子中又含有1個由3個單糖組成的糖鏈和母核上連結(jié)的羧基又使其具有一定的水溶性，故在油水分配體系的選擇過程中，應選擇更接近生物相、極性和溶解性均較好的正辛醇為油相[15]。所以，本實驗選用正辛醇-水系統(tǒng)作為其最佳油水分配體系。

　　在測定白頭翁皂苷D的平衡溶解度過程中，本實驗主要根據(jù)不同時間點樣品濃度變化和試管壁上附著過量的白頭翁皂苷D為指標，確定白頭翁皂苷D是否達到平衡。由白頭翁皂苷D在不同介質(zhì)中的平衡溶解度可知，白頭翁皂苷D溶解性較差，難以有效地被機體吸收，從而導致其生物利度較差。白頭翁皂苷D在不同緩沖鹽溶液中隨pH升高其溶解度不斷增加，這可能與其結(jié)構(gòu)上含有羧基有關(guān)，白頭翁皂苷D在堿性條件下易形成鹽，并隨著堿鹽增加其溶解度升高，故可以考慮通過讓其形成鹽提高溶解度，從而提高生物利用度。

　　根據(jù)本實驗對白頭翁皂苷D平衡溶解度及油水分配系數(shù)的測定結(jié)果可知其水溶性較差，根據(jù)文獻，藥物lgPapp在-1～1時藥物吸收較好[16]，該結(jié)果說明機體對白頭翁皂苷D的吸收性較好。按照BCS（biopharmaceuticsclassificationsystem）分類可知，白頭翁皂苷D屬于低溶解度、高透過性的藥物，所以，研制白頭翁皂苷D口服制劑的關(guān)鍵在于增加藥物在體內(nèi)的溶出度，進而有利于提高其生物利用度。

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