動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一種多因素導致的慢性血管性疾病。AS是一個慢性炎癥過程，它可導致血管局部單核細胞浸潤，促脂質沉積，導致AS早期病變發生。研究認為，血管內皮受損是AS發生的始動環節，其中氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是誘導內皮細胞促炎癥細胞因子和促炎癥分子表達的主要原因，在內皮細胞損傷發生發展過程中起著關鍵作用[1]。

　　[摘要]目的：研究牛樟芝對高脂血癥大鼠主動脈內皮損傷相關基因表達的影響。方法：SD大鼠50只，隨機分為5組：正常對照組（N組）、模型組（M組）、牛樟芝低（AC-L）、中（AC-M）、高（AC-H）劑量組（250，500，1000mg・kg-1）。用高脂飼料喂養建立大鼠高脂血癥模型。10周給藥后，分別測定實驗大鼠血脂、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平，主動脈血凝素樣氧化低密度脂蛋白（LOX-1）、P38絲裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）、核轉錄因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白表達；電鏡觀察主動脈內皮損傷情況。結果：M組血清膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量顯著升高（P<0.01），高密度脂蛋白（HDL-C）含量顯著降低（P<0.01）；與M組相比，AC-M和AC-H組內皮損傷程度減輕，血清TC，TG，LDL-C含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），HDL-C含量升高但無統計學意義，血清SOD活性顯著增加（P<0.01，P<0.05），MDA和ox-LDL水平顯著減少（P<0.05或P<0.01），主動脈LOX-1，P38MAPK，NF-κBmRNA和蛋白表達量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。結論：牛樟芝可通過抑制主動脈LOX-1，P38MAPK，NF-κB的表達，改善大鼠內皮脂質損傷，較好地保護主動脈內皮細胞，免受脂質氧化損傷。

　　[關鍵詞]中國醫學期刊網,牛樟芝,SD大鼠,高脂血癥,內皮損傷

　　目前，AS主要是靠藥物治療，牛樟芝（Antrodiacinnamomea，AC）作為一種真菌類中藥材，具有抗腫瘤、抗氧化、保肝、抗炎等功效[2]。目前，牛樟芝的效用在腫瘤及癌癥方面研究較為普遍，對主動脈內皮損傷研究甚少。本文旨在探討牛樟芝對高脂飲食大鼠主動脈內皮損傷相關基因表達的影響，從而為進一步明晰牛樟芝預防高脂飲食大鼠內皮損傷的機制提供理論依據。

　　1材料

　　1.1藥物液態牛樟芝，上海市腫瘤研究所提供，使用時用0.9%的生理鹽水配置成25%的牛樟芝藥物溶劑。

　　1.2試劑與儀器超氧化物歧化酶和丙二醛測試盒均購自南京建成生物工程研究所；大鼠主動脈LOX-1，P38MAPK，NF-κB酶聯免疫試劑盒（上海杰美GENMED醫藥科技有限公司）；Trizol核酸提取試劑、反轉錄PCR試劑盒和Real-timePCR試劑盒購自Takara寶生物（大連）有限公司。HITACHI7170A全自動生化分析儀（日本日立公司）；EL×800全波長酶標儀（美國Bio-Tek公司）；ABI7500熒光定量PCR儀（美國應用生物系統公司）；DYY8C型電泳設備（北京市六一儀器廠）；電泳凝膠成像分析系統（英國Syngene公司）；SEM（S-4800）掃描電鏡（日本日立公司）。

　　1.3動物清潔級雄性健康6周齡Sprague-Dawley大鼠50只，體重（220±20）g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK（京）2006-0009。

　　2方法

　　2.1高脂血癥大鼠模型的建立及分組給藥方案將50只SD大鼠隨機分為5組：正常對照組（N組）、模型組（M組）、牛樟芝低（AC-L）、中（AC-M）、高（AC-H）劑量組，每組10只。N組喂食基礎飼料，其余各組給予高脂飼料（78.8%基礎飼料、10%蛋黃粉、10%豬油、1%膽固醇、0.2%膽鹽）。造模同時，低、中、高劑量組每日以250，500，1000mg・kg-1牛樟芝溶劑灌胃，連續給藥10周。各組大鼠自由進食和飲水，室溫（20±3）℃，濕度55%。每周日稱大鼠體重。

　　2.2血液和組織樣本采集第10周末，所有大鼠均禁食過夜。用2%戊巴比妥鈉（50mg・kg-1）腹腔注射麻醉。腹主動脈取血，3000r・min-1離心10min，分離出血清分裝于Eppendorf管中，-20℃凍存待測。小心剝離大鼠腹主動脈，剔除結締組織，切下1/3迅速置于10%中性多聚甲醛溶液中固定，其余部分迅速置于液氮中冷凍，并于-80℃超低溫冰箱保存待測。

　　2.3血脂指標和血清相關指標的測定采用全自動生化分析儀測定血清中膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量；分光光度比色法測定血清中超氧化物歧化酶（SOD）的含量；TBA法測定血清中丙二醛（MDA）的含量。所有操作均嚴格參照試劑盒說明書進行。

　　2.4實時熒光定量PCR法檢測主動脈LOX-1，P38MAPK，NF-κBmRNA表達量Trizol試劑提取主動脈組織總RNA，按照試劑盒說明書操作步驟，獲得cDNA產物，并進行PCR反應，β-actin為內參。引物序列檢索自NCBI-Nucloetide數據庫，采用Primesr5.0軟件設計，引物由上海生工生物公司合成。LOX-1，P38MAPK，NF-κBmRNA表達分析采用Real-timePCRSYBGreen熒光染料法測定，配置20μL體系，具體操作參照試劑盒說明書，每個樣品3個重復。循環條件為：預變性95℃30s；PCR反應95℃5s，60℃34s（共40循環），95℃15s，60℃1min，95℃15s。β-actin上游引物TGTGAAATAGGGGCTGTG，下游引物GGAAGAGGGAAGAACTGG；LOX-1上游引物AAAAAGTCGGGAGAATTGCCTATC，下游引物CCGGGTTTTTGCTTCTGGTCTT；P38MAPK上游引物TTGGTCTGTTGGATGTGTTTAC，下游引物TGGATTATGTCAGCCGAGTG；NF-κB上游引物ATCTGTTTCCCCTCATCTTTCC，下游引物TGGGTGCGTCTTAGTGGTATCT。軟件自動生成擴增曲線及融解曲線。2-ΔΔCt值法計算mRNA表達水平。本實驗提示，牛樟芝可以降低高脂飲食大鼠的體重及血清TC，TG，LDL-C含量，同時能夠改善內皮損傷癥狀。牛樟芝對機體主動脈內皮損傷的改善作用可能是通過減少脂質過氧化的中間產物MDA，抑制ox-LDL生成，使LOX-1，P38MAPK，NF-κB表達降低來實現。

　　[參考文獻]

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